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技術文章
分享一下鉬釩酸顯色液的配置方法
更新時間:2020-09-28
鉬釩酸顯色液
有兩類:根據被檢物的化學組成是否遭受破壞,分為破壞性顯色液和非破壞性顯色液。
在實驗中我們一般將它調配成A,B兩種液體,當需要顯色時就分別加入A,B液,當混合液與實驗中復合物(抗原抗體復合物)反應就會產生顯色效果。
A液一般由:PBS緩沖液,檸檬酸,ED-TA乙二氨四乙酸,ProcLin-300,過氧化氫(過氧化氫揮發(fā)性太高,容易丟失,我們現在正用過氧化脲來代替,效果還不錯)組成。
B液一般由:PBS緩沖液,檸檬酸,ED-TA乙二氨四乙酸,ProcLin-300,硫代硫酸鈉等。
由于
鉬釩酸顯色液
的反應一旦開始就一直持續(xù)反應,所以,當達到理想效果時一定要終止反映,就需要加入終止液了。
鉬釩酸顯色液的配置方法:
試劑:
1)鹽酸(1+1水溶液)硝酸高氯酸
2)釩鉬酸銨顯色劑:稱取偏釩酸銨1.25g,加硝酸250ml,另稱取鉬酸銨25g,加水400ml加熱溶解,在冷卻的條件下,將兩種溶液混合,用水定容成1000ml。避光保存,若生成沉淀,則不能繼續(xù)使用。
3)磷標準液:將磷酸二氫鉀在105oC干燥1h,在干燥器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水,定量轉入1000ml容量瓶中,加入硝酸3ml,用水稀釋至刻度,搖勻,即為50mg/ml的磷標準液。
試樣的分解
干法:與Ca測定試樣的制備方法一致,在實際中,Ca,P使用同一分解液。
標準曲線的制備:
準確移取磷酸標準液,取0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0ml于50ml容量瓶中,各加釩鉬酸銨顯色劑10ml,用水稀釋至刻度,搖勻,常溫下放置10min以上,以0ml溶液為參比,用10mm比色池,在420nm波長下,用分光光度計測定各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線。
試樣的測定:
準確移取試樣分解液0.5ml—10ml(含磷量50—750mg)(實際中取0.5ml)于50ml容量瓶中,加入釩鉬酸胺顯色劑10ml,按5的方法顯色和比色測定,測得試樣分解液的吸光度,用標準曲線查得試樣分解液的含磷量。一般先要將植物樣品的消化,再蒸餾、吸收和滴定。
測定N的話一般用凱氏法測定,測P一般用鉬藍比色法在分光光度計(72型)讀出消光值,對比標準曲線得出。
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